大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍：                                                                                                                    96T
0.5µg/L - 12µg/L
 
使用目的：
大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）含量。
實(shí)驗(yàn)原理
大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）水平。 用純化的大鼠Ⅱ型
膠原（Col Ⅱ）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Ⅱ型膠原（Col
Ⅱ），再與HRP 標(biāo)記的Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)
*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化
成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波
長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）濃度。  
試劑盒組成  
1  30倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標(biāo)試劑  6ml×1瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品（24µg/L）  0.5ml×1 瓶
3  酶標(biāo)包被板  12 孔×8條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說(shuō)明書(shū)  1 份
5  顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張    
6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個(gè)
標(biāo)本要求  
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
12µg/L  5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6µg/L  4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3µg/L  3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5µg/L  2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.75µg/L  1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 
 
2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同） 、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl， 待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測(cè)樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。      
4.  配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。  
7.  溫育：操作同3。
8.  洗滌：操作同5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色） 。
11.  測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值） 。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值） ，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） 。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10.  如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1．大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月