Elisa試劑盒是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。雖然elisa試劑盒的操作步驟看似簡單，但沒做到位的話就會影響實驗的效果。所以elisa試劑盒實驗時至關重要的步驟有：
*、重要的洗滌：
不充分的洗滌會導致差異和高背景，從而帶來不理想的實驗結果。如果未結合的材料殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。有必要的話，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結合反應。如果背景過高，懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數。
第二、關鍵的封閉：
封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。如果背景過高，懷疑封閉不充分，那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。
目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。
第三、抗體濃度須優化：
如果試劑稍有不同，則可能需要優化抗體的量。非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。
第四、檢測試劑要適量：
切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優化一下何時應加入終止液。
只有確保每一步操作都做到位，才會呈現的實驗結果。所以elisa實驗的每一步都很重要，不可以掉以輕心。